革兰氏染色步骤

革兰氏染色步骤详解

革兰氏染色是细菌分类和鉴定中的一项经典技术，由丹麦细菌学家汉斯·克里斯蒂安·革兰于1884年发明。该方法通过特定的染色步骤将细菌分为两大类：革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-），从而为后续研究提供重要依据。以下是革兰氏染色的具体操作步骤：

首先，取样并制备涂片。从待检测的样本中提取少量细菌，将其均匀涂抹在干净的载玻片上，并自然晾干或用酒精灯快速加热固定，确保细胞牢固附着于玻片表面。

其次，进行初染。将涂片完全浸没在结晶紫溶液中，持续约1分钟，使细菌充分染色。然后用清水冲洗掉多余染料，避免过度残留。

接着是媒染步骤。使用碘液覆盖涂片，静置1分钟左右，目的是让结晶紫与碘形成复合物，增强染色效果并提高细胞壁对后续脱色剂的抗性。

随后进入脱色阶段。采用95%乙醇或丙酮快速冲洗涂片，时间控制在10-30秒之间。这一过程会溶解革兰氏阴性菌细胞壁中的脂质成分，导致其内部的紫色复合物被洗脱，而革兰氏阳性菌由于细胞壁较厚且致密，仍保留紫色。

最后是复染环节。用番红或其他红色染料对涂片进行复染，持续约1分钟。此时，未被初染固定的革兰氏阴性菌会被染成红色，而革兰氏阳性菌则保持原有的紫色。

观察结果时，可在显微镜下检查涂片，革兰氏阳性菌呈现深紫色，革兰氏阴性菌则呈红色。通过此法，研究人员能够迅速区分不同类型的细菌，为进一步实验提供方向。整个过程简单高效，是微生物学领域不可或缺的技术手段之一。

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